人类免疫缺陷病毒抗体(HIV 1+2)及抗原(HIV 1P24)联合检测试剂盒(酶联免疫法)
【生产厂家】Murex Biotech Ltd.
【批准文号】
【剂 型】诊断试剂盒
【规 格】96孔
【医保类型】
【国家基本药物】否
【正文】
Murex人类免疫缺陷病毒抗体（HIV 1+2）及抗原（HIV1 P24）联合检测试剂盒（酶联免疫法）
用途
本品用于人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1及HIV-1型O群)、HIV-2型抗体及HIV1 P24抗原的检测。
摘要和试验说明
两种的人类免疫缺陷病毒HIV-1，HIV-2是引起获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的病原体，这两种逆转录病毒是通过接触受感染的体液传播的，主要通过血液、生殖器分泌物和母婴传播。据报道HIV-1的感染遍及全球，而HIV-2的感染主要发生在西非和一些欧洲国家。
这两种病毒的gag蛋白和pol蛋白有很强的抗原交叉反应，但其膜（区）的糖蛋白却很少有交叉反应。
如果用于筛查，就需要用这两种病毒的膜蛋白表位及具有交叉反应的(核心区)gag或pol蛋白作抗原，以确保能检测出这两种病毒不同感染阶段的抗体。HIV-1变种均归为HIV-1 O亚型，是在科麦隆和欧洲的病人样品中检测出来。O亚型和最初己知的HIV-1(均归为M群)型有很大差别。因根据交叉反应来识别亚型并不令人满意，故可用此病毒膜区的特异性抗原位点来检测感染个体的O亚型抗体。感染HIV后，最早出现的特异性抗体是IgM，随后才出现IgG。通过检测IgM和IgG可以最灵敏地检测出抗-HIV阳转血清，而HIV核心蛋白在抗体阳转前的就能检测出来。
Murex HIV抗原/抗体试剂盒用来检测HIV-1和HIV-2(的外膜)有反应性的HIV核心抗原，以及膜区糖蛋白的IgG、IgM和IgA抗体、HIV—1和HIV—2有交叉反应pol蛋白，因此，可用于对潜在感染的血清、EDTA血浆或柠檬酸血浆的检测。
操作原理
Murex HIV抗原/抗体联检试剂盒是用HIV-1(O)免疫决定簇的合成多肽、重组的HIV—1pol蛋白和HIV-1，HIV-2膜(区)蛋白及抗HIV-1 p24单克隆抗体包被微孔板，用辣根过氧化酶标记的相同抗原和抗p24的其他单克隆抗体的混合物为酶结合物。
被检样品或对照血清在微孔板中孵育，样品或对照血清中的HIV核心区抗原和/或HIV抗体与包被板上的抗体和/或抗原结合，洗去多余部分。然后加入酶结合物，与已结合到孔上的HIV核心抗原和/或抗体结合，如样品中没有核心抗原和/或特异性抗体，酶结合物就不能结合到孔上。
洗去未结合的酶结合物后，孔中加入3，3"，5，5"-四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢溶液，结合有酶结合物的孔呈现蓝绿色，当加入硫酸终止反应后而呈橙色，可通过酶标仪在450nm波长下读数。
试剂
试剂描述、制备和建议的保存条件
亦见警告和注意事项
除非特别说明，所有组分都必须在2-8℃保存。在此条件下，直到效期试剂都能保持其良好的活性。
1．包被板
1块(GE41/7G79-01)或5块(GE42/7G79-02)包被HIV抗原和单克隆抗体的96孔板。
使用前，应先将反应板放置室温后，再取出所用板条。
未使用的板条的放入密封袋中2—8℃保存。
2．样品稀释液
1瓶装量为18ml的绿色溶液，含缓冲液、牛和鼠的蛋白、皂甙、去污剂和0.05％ ProClin 300保护剂。
3．酶结合物
1瓶(GE41/7G79-01)或3瓶(GE42/7G79-02)含1.1ml辣根过氧化酶标记HIV抗原或单克隆抗体的冻干粉，重溶后每瓶可供2块板使用。
4．酶结合物稀释液
1瓶(GE41/7G79-01)或3瓶(GE42/7G79-02)装量为22m1的黄色溶液，含缓冲液、牛蛋白、皂甙、去污剂和O.05％ ProClin 300保护剂。
酶结合物的重溶
轻拍装有酶结合物干粉的瓶子，将附着在橡胶塞上的冻干粉拍落，然后将整瓶的酶结合物稀释液倒入瓶中，盖上瓶盖，将瓶子轻轻颠倒几次混匀，至少放置30分钟使其溶解，每隔一段时间将瓶子旋转一下。酶结合物重溶后呈红色，如有必要，可将其重新倒回装酶稀释液的瓶中重溶后的酶结合物在2－8℃最长可保存4周。
5.抗－HIV-1阳性对照
1瓶经化学灭活的含有HIV-1抗体的人血清，装量为1.7ml（缓冲液中有牛白蛋白），该血清HBsAg和HCV抗体阴性，含0.05％ Bronidox保护剂。
6.抗－HIV-2阳性对照
1瓶经化学灭活的含有HIV-2抗体的人血清，装量为1.7ml（缓冲液中有牛白蛋白），该血清HBsAg和HCV抗体阴性，含0.05％ Bronidox保护剂。
7.HIV-1 p24阳性对照
1瓶经灭活的p24（人源细胞培养物），装量为1.7ml（缓冲液中有牛白蛋白）。
8.阴性对照
1瓶(GE41/7G79-01)或2瓶(GE42/7G79-02)正常人血清，装量为2.5ml，与HBsAg、HIV-1抗体、HIV-2抗体、HCV抗体和HTLV抗体阴性，含0.05％ Bronidox保护剂。
9.底物稀释液
1瓶含柠檬酸三钠和过氧化氢的无色溶液，装量为35ml。
10.底物浓缩液
1瓶含3，3’，5，5’－四甲基联苯胺（TMB）和稳定剂的橙色溶液，装量为35ml。
底物液
配制底物液时，取一个洁净的玻璃容器或新的聚苯乙烯瓶，将一定体积的无色底物稀释液加入等体积的橙色底物浓缩液中，稀释后溶液呈浅黄色。
必须按照如上配液顺序且配制底物液时所用的移液器及玻璃器皿必须干净。另外，还可以将整瓶底物稀释液倒入底物浓缩浓液瓶中来配制底物液。1瓶底物液的量足够5块板使用，见表1:
表1 所需底物浓缩液和底物稀释液的体积
若使用自动化系统所需要的底物液可能会多一些，底物液须避光保存。底物液应是浅黄色的；如果在使用前已是绿色，表明试剂失效，需弃掉重新配制。
配好的底物液可与其它Murex使用橙色底物浓缩液的试剂盒中的底物液互换使用，但要确保底物液是经底物浓缩液和底物稀释液共同配制的。
配好的底物液2－8℃稳定，在15－25℃可稳定2天，如果有结晶必须弃掉。
1.1.洗液
含0.2％ Bronidox保护剂的1瓶(GE41/7G79-01)或2瓶(GE42/7G79-02)含125ml，20倍工作浓度的甘氨酸/硼酸盐洗液。
根据需用量将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水按1:20稀释或将整瓶浓缩洗液稀释到2500ml，稀释后的洗液中含0.01％ Bronidox保护剂。
稀释好的洗液可与其它Murex试剂盒中的甘氨酸/硼酸盐洗液互换使用，但要确认洗液装量及配制时准确稀释。
洗液放入密封容器中，室温条件下保存1个月，其活性不变。
注:洗液在存放过程中，可能会显浅黄色，但不影响试验结果。
注:尽管底物液和洗液可与其它Murex试剂盒中的同种液体互换使用，但若该成份已过效期时，不能使用。
警告和注意事项
此试剂只适用于体外诊断，仅供专业人员使用。请参照生产商提供的安全数据表和有潜在危险成份上的标志。
健康和安全信息
注意:此试剂盒含人源物质，没有一种方法能完全保证人源的产品不传播感染。因此，所有的人源物质都应以潜在感染物质对待。试剂和试验样品都应按试验室工作规范操作。阴性对照血清经HBsAg、HIV抗体、HCV抗体和HTLV抗体筛查阴性。
抗－HIV-1和抗－HIV-2阳性对照、HIV-1 p24阳性对照虽经灭活，但操作时仍应注意。
1.非一次性使用的器具在使用后必须消毒，最佳方法是121℃高压灭菌1小时；一次性使用的物质应高压或焚烧。
2.溢出的有潜在感染的物质必须及时用吸水纸擦掉，污染区域用1.0％次氯酸钠消毒处理。如果是酸性溢出物，必须先将污染区域擦干，否则不能使用次氯酸钠消毒。用于清洁溢出物的物质如手套，应作为有潜在生物污染的废弃物处理。不要将含次氯酸钠的物质高压灭菌。
3.已中和的酸和其它废液通过加入足够量的次氯酸钠使其终浓度为1.0％，并在该浓度的次氯酸钠中处理30分钟以达到有效消毒。
4.不要用嘴吸样。处理样品或试验时，应戴一次性手套和防护镜。试验结束后，要彻底洗手。
5.下列试剂中含有低浓度有害或刺激性物质:
a）酶结合物和样品稀释液中含ProClin 300，是一种能通过皮肤吸收的致敏剂。
如果有任何试剂接触皮肤和眼睛，必须用大量水对接触区域进行清洗。
6.用于终止液的硫酸和用于清洗玻璃器皿的盐酸都是极有腐蚀性的物质，使用时一定要小心。如果接触到皮肤和眼睛，应用大量水冲洗。
分析注意事项
1.不要使用过期试剂，避免微生物对试剂的污染而影响试剂的效期和试验结果。
2.不要修改试验步骤，不要用其它厂家生产的或其它批号试剂作为替代品，不要缩短孵育时间。
3.将所有的样品和试剂放至室温后使用。用完后，立即放回推荐的保存温度。
4.所有用过试剂的玻璃器皿都必须用2M盐酸彻底清洗，然后用蒸馏水或去离子水冲洗。
5.避免用自动除霜冰箱来放置试剂和样品。
6.在试验和保存过程中，避免试剂暴露于强光下或接触次氯酸气体。
7.在试验过程中避免反应孔变干。
8.操作要谨慎，避免试剂交叉污染，用来加酶结合物和底物液移液器必须分开。
9.操作要谨慎，避免酶结合物接触或溅到孔的边缘。加样时，避免产生气泡，如有气泡，可用倒吸的方法将气泡吸去。
10.确保反应板底部清洁干燥，并且在读板时，液体表面没有气泡。
11.防止一次性手套的粉尘对反应板的污染。
不要使用CO2培养箱孵育
12.当使用自动化仪器进行测试时，可以不封板和拍干板条。
13.要确保自动化仪器的溶液不污染样品或试剂。
14.试验过程中可将温度控制在37±1℃，以得到满意的试验结果。
15.不要将终止液保存浅盘子中或使用完后倒回瓶中。
样品的采集、运输和保存
样品的采集
血清、含EDTA或柠檬酸的血浆样品均可使用。静脉采血的样品应使其自然凝结，应确保血样完全凝结。任何肉眼可见的物质需离心去除。
样品的运输和保存
样品在2～8℃保存。如果72小时内不检测，样品应从凝结物或细胞沉淀中分离出并在－15℃或以下冷冻保存，避免样品的反复冻融。
操作程序
未提供的必需材料
1.终止液（0.5－2.0M硫酸）:加5.5－11ml分析纯浓硫酸到大约80ml蒸馏水或去离子水中，混匀后加水补足100ml。另外，code7212－01使用1N硫酸。
2.新鲜的蒸馏水或去离子水:用于稀释洗液、配制终止液或自动洗板机清洗。
3.多孔道微量移液器，吸液体积在25－20ul。
4.微量移液器:吸液体积在50－1000ul。
5.能维持37±1℃的水浴箱或孵箱。
6.加热块:用在孵箱中，加热块最好一直放在孵箱内。如果不能，最好在孵箱内放4小时后再进行试验。
7.仪器
a）微孔板洗板机（自动或手动）
b）酶标仪
或
c）全自动仪器
所有仪器必须验证后使用。
请与Murex公司代表联系有关程序、系统、软件及验证方案的详细情况。
8.一次性试剂槽（Code No. RT01/5F24）
9消毒用的次氯酸钠
试验步骤
请于试验前仔细阅读分析注意事项。
